Книжкові видання та компакт-диски Журнали та продовжувані видання Автореферати дисертацій Реферативна база даних Наукова періодика України Тематичний навігатор Авторитетний файл імен осіб
|
Для швидкої роботи та реалізації всіх функціональних можливостей пошукової системи використовуйте браузер "Mozilla Firefox" |
|
|
Повнотекстовий пошук
Пошуковий запит: (<.>A=Tukalo M$<.>) |
Загальна кількість знайдених документів : 4
Представлено документи з 1 до 4
|
1. |
Tukalo M. A. Recognition of tRNAs with a long variable arm by aminoacyl-tRNA synthetases [Електронний ресурс] / M. A. Tukalo, G. D. Yaremchuk, O. P. Kovalenko, I. A. Kriklivyi, O. I. Gudzera // Biopolymers and cell. - 2013. - Vol. 29, № 4. - С. 311-323. - Режим доступу: http://nbuv.gov.ua/UJRN/BPK_2013_29_4_8 У клітинах евкаріотів тРНК трьох специфічностей - тРНК<^>Ser, тРНК<^>Leu і тРНК<^>Tyr - мають довгу варіабельну гілку довжиною 11 - 20 нуклеотидів (2-га група тРНК) на відміну від чотирьох або п'яти нуклеотидів 1-ї групи тРНК. Підсумовано результати проведених досліджень структурних основ упізнавання та дискримінації тРНК 2-ї групи серил-, тирозил- і лейцил-тРНК синтетазами з Thermus thermophilus (CepPC, TиpPC і ЛейPC), одержаних методами рентгенівської кристалографії та хімічної модифікації тРНК у розчині. На сьогодні кристалічна структура відома для всіх трьох комплексів аміноацил-тРНК синтетаз з відповідними тРНК 2-ї групи, різні типи впізнавання яких обговорено в огляді. Зокрема, особливу увагу приділено результатам аналізу впізнавання гомологічними синтетазами характерних рис просторової структури тРНК 2-ї групи. У тРНК<^>Ser, тРНК<^>Leu і тРНК<^>Tyr орієнтація довгої варіабельної гілки відносно основного тіла тРНК відрізняється та контролюється різною упаковкою корової частини молекули. У разі CepPC N-кінцевий, а в разі TиpPC - C-кінцевий домени зв'язуються з певними структурами довгих варіабельних гілок гомологічних РНК, упізнаючи таким чином унікальну структурну форму тРНК. Корова частина тРНК<^>Leu має кілька шарів незвичайних пар основ, виявлених під час вивчення кристалографічної структури комплексу тРНК<^>Leu з ЛейPC із Т. thermophilus та під час дослідження вільної тРНК у розчині за методом хімічної модифікації з використанням специфічних реагентів. У кристалографічній структурі комплексу ЛейPC-тРНК<^>Leu унікальна будова D-стебла впізнається C-кінцевим доменом ЛейPC і ці дані добре узгоджуються з результатами, одержаними в розчині. ЛейPC притаманний канонічний для синтетаз I структурного класу тип упізнавання тРНК - з боку D-стебла і малої борозенки акцепторного стебла. Для CepPC також характерний канонічний для синтетаз II структурного класу тип упізнавання тРНК - з протилежного боку, тобто з боку варіабельного стебла і великої борозенки акцепторного стебла. І, нарешті, TиpPC на відміну від канонічного для ферментів I класу типу має тип упізнавання тРНК, властивий синтетазам II класу.
| 2. |
Yaremchuk A. D. Prolyl-tRNA synthetase from Thermus thermophilus is eukaryotic-like but aminoacylates prokaryotic tRNA Pro [Електронний ресурс] / A. D. Yaremchuk, K. S. Boyarshin, M. A. Tukalo // Biopolymers and cell. - 2012. - Vol. 28, № 6. - С. 434-440. - Режим доступу: http://nbuv.gov.ua/UJRN/BPK_2012_28_6_5
| 3. |
Rayevsky A. V. Molecular docking and molecular dynamics simulation studies on Thermus thermophilus leucyl-tRNA synthetase complexed with different amino acids and pre-transfer editing substrates [Електронний ресурс] / A. V. Rayevsky, M. A. Tukalo // Biopolymers and cell. - 2016. - Vol. 32, № 1. - С. 61-69. - Режим доступу: http://nbuv.gov.ua/UJRN/BPK_2016_32_1_10 Мета роботи - вивчення структурних особливостей, що забезпечують селективність аміноацилюючого сайту лейцил-тРНК синтетази із Thermus thermophilus (LeuRSTT) по відношенню до амінокислот, і пояснення механізму зв'язування субстрату претрансферного редагування. Вісім амінокислот, запропонованих як субстрати аміноацилювання і вісім аміноациладенілатів (сформованих з АМФ і восьми амінокислот) було підготовлено у вигляді цвіттер-іонів. Кристалічну структуру білка із субстратом в аміноацилюючому сайті [PDBID:1OBH] було одержано із RCSB бази даних. Параметри докінгу й оцінка ефективності ліганду припускали дворазовий аналіз конформацій за допомогою пакету Gold CCDC. Моделювання молекулярної динаміки проводилось з використанням Gromacs. Процедури релаксації та детального дослідження було розподілено на 2 послідовних моделювання тривалістю 50 нс і 5 нс. Оцінку ефективності зв'язування 8-ми амінокислот було здійснено завдяки аналізу на основі 2-х оціночних функцій і було показано, що ліганди LeuRSTT за цими властивостями можна розташувати в наступному порядку: Leu > Nva > Hcy > Nle > Меt > Cys > Ile > Val. МД показала нижчі електростатичні взаємодії ізолейцину з активним сайтом ферменту у порівнянні з норваліном і лейцином. У випадку аміноациладенілатів суттєвих відмінностей не було знайдено. Молекулярна динаміка лейцил-, ізолейцил- і норваліладенілату показала, що найбільш стабільним і конформаційно вигідним субстратом є лейцин, а не норвалін і ізолейцин. Крім того, було виявлено, що TYR43 в активному сайті екранує карбоксильні групи лейцину і норваліну і відхиляється убік за присутності ізолейцину, дозволяючи молекулі води наблизитися. Висновки: в дослідженні виявлено деякі причини відбору субстратів залежно від форми, розміру і гнучкості радикала. Результати для різних амінокислот, одержані за допомогою молекулярного докінгу і МД, добре корелюють з експериментальними даними за першим етапом аміноацилювання. МД аміноациладенілатів показала, що складність в активації деяких амінокислот може бути викликана двома причинами: надмірною гнучкістю через розмір радикалу або структуру і швидким гідролізом проміжного субстрату під час нуклеофільної атаки молекулами води.
| 4. |
Rybak M. Yu. Cloning, expression and purification of D-Tyr-tRNA Tyr -deacylase from Thermus thermophilus [Електронний ресурс] / M. Yu. Rybak, O. P. Kovalenko, I. A. Kryklyvyi, M. A. Tukalo // Biopolymers and cell. - 2015. - Vol. 31, № 3. - С. 179-186. - Режим доступу: http://nbuv.gov.ua/UJRN/BPK_2015_31_3_4 D-Тир-тРНК<^>Тир-деацилаза (DTD) є консервативним білком, що забезпечує додатковий коригувальний етап гідролізу помилково аміноацильованих субстратів D-Тир-тРНК<^>Тир. DTD здатна приcкорювати гідроліз ефірного зв'язку в комплексі D-Тир-тРНК<^>Тир, утворюючи вільну тРНК та D-Тир, таким чином запобігаючи включенню D-амінокислот до білків. Деацилаза розрізняє D- та L-аміноацильні залишки в аміноацильованій тРНК та не гідролізує останні. Структурні основи такої специфічності та механізм гідролізу D-аміноацил-тРНК за участі DTD є недостатньо зрозумілими. Мета. Клонувати D-Тир-тРНК<^>Тир-деацилазу з T. thermophilus(DTDTT), оптимізувати умови її експресії в E. coli, розробити ефективний метод очищення з високим виходом високоякісного ферменту, для структурних та функціональних досліджень. Ампліфікацію та клонування гена DTD з геномної ДНК T. thermophilus в pProEXHTb експресуючий вектор проведено за стандартними молекулярно-біологічними методами. Очистку рекомбінантного DTD білка проведено хроматографічно. Залишки гістидину відщеплено від DTD протеазою вірусу тютюну (TEV), ефективність реакції перевірено Вестерн-блот аналізом з анти-His-антитілами. Молекулярну масу очищеної DTDTT визначено гель-фільтрацією. Одержану конструкцію pProEXHTb, що містить DTD послідовність з T. thermophilus, експресовано в E.coli штаму BL21(DE3)pLysS. Цільовий рекомбінантний білок виділено і очищено комбінацією хроматографій: афінної (Ni-NTA), аніон-обмінної (Q-Sepharose) та гель-фільтрації (Superdex S200) до чистоти 90 %. Вихід рекомбінантної DTD склав 2 мг з одного літру культури. Визначена молекулярна маса очищеної DTD з T. thermophilus 32 кДа свідчить на користь її димерної структури. Висновки: одержаний вектор pProEXHTb, що містить DTD з T. thermophilus, і підібрані умови очистки надають змогу одержати рекомбінантний DTD в кількостях, достатніх для подальших структурно-функціональних досліджень.
|
|
|